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| Nom | Maestro |
| Description | Ce savant distrait à la longue barbe incarne l'inventivité du genre humain. Il est aussi souvent le narrateur des épisodes. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Chef de la cellule, ses assistants hésitent souvent à le réveiller. En version globule rouge, il porte le nom de Maître Globus. |
| Nom | Métro |
| Description | Droïde rouspéteur, savant et passionné inventé par Maestro dans "Il était une fois... l'Espace". Son courage et son savoir sont des aides précieuses. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Chef des anticorps. |
| Nom | Le Nabot |
| Description | Personnage sournois et lâche, il est le conseiller du Teigneux. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Chef des virus. |
| Nom | Le Gros |
| Description | Meilleur ami de Pierre marqué par sa tendance à l’embonpoint. Sa force physique en fait le principal obstacle aux plans du Teigneux. |
| Nom | Petit Gros |
| Description | Fils du Gros, meilleur ami de Pierrot. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | il est le chef des globules blancs qui mangent virus et bactéries. Il existe une version globule rouge : Hémo. |
| Nom | Pierre |
| Description | Homme de son temps honnête et loyal, c'est le père de Pierrot avec qui il se confond parfois. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Avec le titre de colonel, il est le chef de la police du corps et le formateur des jeunes globules blancs. |
| Nom | Pierrot |
| Description | Jeune homme ou enfant, il est le héros de la plupart des épisodes. Il est très intéressé par les inventions de Maestro. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Enfermé dans sa capsule c'est le chef des lymphocytes. Il largue des anticorps sur les ennemis. |
| Nom | Pierrette |
| Description | Femme de Pierre, elle incarne la femme de son temps. Bonne mère de famille, elle n'est pas une épouse soumise. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Sous le nom de Globine, c'est une globule rouge futée aux grands yeux innocents. |
| Nom | Psi |
| Description | Son vrai nom, Mercedes, n'est mentionné que dans quelques épisodes de "Il était une fois... l'Espace". Amie de Pierre, son surnom vient de sa forte intuition. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Assistante de Pierrot, elle est une lymphocyte qui largue des anticorps sur virus et bactéries. |
| Nom | Le Teigneux |
| Description | Personnage méchant, cruel, brutal, ambitieux et obscurantiste. Il veut être chef et pour cela suit les conseils du Nabot. |
| Rôle dans Il était une fois... la Vie | Chef des bactéries comme la salmonelle ou les staphylocoques. |